17羥孕酮elisa試劑盒是用于定量測量樣本中17羥孕酮(17-OHP)含量的實驗工具。采用了競爭性抑制酶免疫分析技術(shù)或雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附法。在檢測過程中,特異性抗體與樣本中的17-OHP發(fā)生競爭性結(jié)合反應,通過酶標儀測量反應后的顏色深淺來間接反映樣本中17-OHP的濃度。
1、試劑與樣本處理:
所有試劑在使用前應達到室溫(20-25℃),以避免溫度變化對反應的影響。
樣本在收集后應盡快進行處理,避免反復凍融導致樣本質(zhì)量下降。例如,血清和血漿樣本在離心后應迅速分離,并盡快進行實驗或分裝保存。
不能檢測含NaN3的樣品,因為NaN3會抑制辣根過氧化物酶(HRP)的活性,影響實驗結(jié)果。
2、避免交叉污染:
在實驗過程中,應小心操作,避免不同試劑或樣本之間的交叉污染。
使用一次性手套、吸頭等耗材,并在每次更換樣本或試劑時更換新的吸頭。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
3、控制實驗條件:
確保實驗環(huán)境的溫濕度穩(wěn)定,避免強光直接照射和電磁干擾。
使用高精度的儀器和設(shè)備,如酶標儀,以提高實驗結(jié)果的準確性。
嚴格按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
4、試劑保存:
試劑盒中的試劑應在規(guī)定的條件下保存,如2-8℃冷藏,避免高溫、潮濕和陽光直射。
濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子;底物B對光敏感,應避光保存。
5、加樣與洗滌:
加樣時應將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。
6、顯色與測定:
顯色劑應呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
在加入終止液后應立即測定結(jié)果,避免顏色變化影響實驗結(jié)果。
測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。
7、廢棄物處理:
實驗過程中產(chǎn)生的廢棄物應按照實驗室規(guī)定進行分類處理,避免對環(huán)境造成污染。
所有樣品、洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,特別是當樣本中存在可能傳播疾病的病原體時。
8、特殊樣本處理:
對于某些特殊類型的樣本(如細胞培養(yǎng)上清),由于干擾因素較多,可能需要額外的預處理步驟或采用特定的檢測方法。
如果血清中大量顆粒,檢測前應先離心或過濾。