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大鼠睫裝神經營養因子(CNTF)檢測試劑盒實驗原理

日期:2020/9/11瀏覽:947次

                                  大鼠睫裝神經營養因子(CNTF)檢測試劑盒說明書
 
實驗原理
是采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被兔α2巨球蛋白(A2M)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的兔α2巨球蛋白(A2M)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。 
大鼠睫裝神經營養因子(CNTF)檢測試劑盒樣本處理要求
1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。 
2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能人上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
大鼠睫裝神經營養因子(CNTF)檢測試劑盒優勢
1.  品種齊全、質量可靠、靈敏度高、操作簡便、穩定性好。
2. 特異性強:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
3. 重復性好:板內變異系數小于10% ,板間變異系數小于15% 。
4. 同城(上海)需要代測可免費上門取樣,享送貨上門服務。
5. 根據客戶需求專業定制elisa試劑盒并提供免費代測服務。
6. 臻科生物可提供專業技術服務,全方為您解決實驗進程中所遇到一切實驗問題。
四、ELISA試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標板
8孔×12條
8孔×6條

標準品
0.3mL*6管
0.3mL*6管

樣本稀釋液
6mL
3mL

檢測抗體-HRP
10mL
5mL

20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說明書進行稀釋
底物A
6mL
3mL

底物B
6mL
3mL

終止液
6mL
3mL

封板膜
2張
2張

說明書
1份
1份

自封袋
1個
1個

大鼠睫裝神經營養因子(CNTF)檢測試劑盒注意事項
1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產品。
10. 實驗還需要酶標儀(450nm),37℃恒溫箱,高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL以及蒸餾水或去離子水。
11. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。
12. 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
13. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
實驗結果計算 
以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
八、關于兔α2巨球蛋白(A2M)定量ELISA試劑盒的特別說明
公司長期專業供應各類科研產品,包括ELISA試劑盒、農殘試劑盒、放免試劑盒、生物試劑、檢測卡等優質產品。

 

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